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1. CHIP-seq
??ChIP-Seq技術(shù)是研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具,利用該技術(shù)可以檢測轉(zhuǎn)錄因子與DNA的動(dòng)態(tài)調(diào)控作用,各種組蛋白修飾,染色質(zhì)調(diào)控因子等,轉(zhuǎn)錄因子與組蛋白修飾的ChIP-Seq示意圖如下:
??ChIP-Seq技術(shù)包括兩部分:建庫和測序,建庫和測序的質(zhì)量對(duì)于后續(xù)分析尤為關(guān)鍵,但是建庫前ChIP實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)也同樣重要。從實(shí)驗(yàn)的操作來講ChIP主要分為兩大類,一類是X-ChIP,一類是N-ChIP。其中N-ChIP不涉及甲醛交聯(lián),更適合那些和DNA有強(qiáng)相互作用的蛋白ChIP-seq實(shí)驗(yàn),主要就是組蛋白;而X-ChIP采用甲醛交聯(lián)就沒有這個(gè)限制,廣泛適用于轉(zhuǎn)錄因子, 組蛋白, 聚合酶等蛋白的結(jié)合片段測序。
實(shí)驗(yàn)流程、建庫流程、分析流程:
1.1. Chip-seq可以告訴我們什么信息
chip-seq可以告訴我們一些什么信息?
基礎(chǔ)分析系列:
我們實(shí)驗(yàn)處理后送樣測序的數(shù)據(jù)基本情況(測序下機(jī)數(shù)據(jù)質(zhì)量情況)
這些測序數(shù)據(jù)都分布在參考基因組的什么位置,以及比對(duì)結(jié)果如何(比對(duì)參考基因組情況)
這些reads的分布有哪些區(qū)域具有顯著成峰(Peak)特征(CallPeak情況)
這些Peak區(qū)域可能影響到的基因是什么,這些Peak距離基因多遠(yuǎn),又位于什么區(qū)域(Peak附近的臨近基因注釋結(jié)果及可視化情況統(tǒng)計(jì))
這些基因都普遍具有什么樣的功能(富集到什么通路上,臨近注釋基因集的富集結(jié)果)
這些Peak結(jié)合區(qū)域,都可能結(jié)合到一些什么樣的蛋白(motif預(yù)測情況)
高級(jí)分析系列:
差異Peak分析:可以尋找到兩組不同生物模型比較表觀水平的改變差異
Chip-seq與RNA-seq聯(lián)合分析:可以尋找一些表觀水平差異與基因轉(zhuǎn)錄水平改變的關(guān)聯(lián)性
超級(jí)增強(qiáng)子(SEs, Super-enhancers )鑒定分析:可以找到影響轉(zhuǎn)錄水平異常增加的一系列表觀水平的相互作用區(qū)域
核心調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(CRC, Core transcription regulatory circuitry )分析:可以從SEs中通過調(diào)控網(wǎng)絡(luò)關(guān)系找到的核心影響轉(zhuǎn)錄因子
1.1.1. chip seq 報(bào)告解讀
我們的Chip-seq分析報(bào)告展示:
分析案例:
報(bào)告解讀:
1.1.2. Peak_Motif分析意義(homer)
homer_motif 分析能給到我們什么信息?