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CRISPR dCas9—轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)

      2013年，齊等人將來自化膿性鏈球菌的Cas9的核酸酶結(jié)構(gòu)域（在HNH結(jié)構(gòu)域中產(chǎn)生H840A突變和在RuvC結(jié)構(gòu)域中產(chǎn)生D10A突變）進行突變，以產(chǎn)生核酸酶缺陷的“dCas9”。這種“鈍化”和“死亡”Cas9失去切割DNA的功能，但在gRNA的指導(dǎo)下仍能以相同的精確度靶向和結(jié)合DNA。

      dCas9蛋白可以與效應(yīng)器（如阻遏蛋白和激活劑結(jié)構(gòu)域）形成融合蛋白，這樣，dCas9可以將這些效應(yīng)器帶到啟動子區(qū)域、調(diào)控區(qū)域或編碼區(qū)域，對任何基因進行精確定點調(diào)控而不造成DNA損傷。可用于研究轉(zhuǎn)錄因子或輔助轉(zhuǎn)錄因子對特定基因的影響。

Figure 1 :dCas9 as a modular system for attachment of transcriptional regulators. dCas9 can easily be fused to effectors (either transcription activators or repressors) for targeted gene regulation. Adapted from Figure 1a of Gilbert et al. (2013).

• 1 . CRISPR-Cas9系統(tǒng)
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機制
  • 1.3. 不同的Cas9系統(tǒng)
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統(tǒng)
• 2 . CRSPER- dCas9系統(tǒng)
  • 2.1. dCas9-轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統(tǒng)
  • 2.3. dcas9-表觀遺傳系統(tǒng)
• 3 . dCas9技術(shù)路線
  • 3.1. gRNA設(shè)計
  • 3.2. dCas9實驗流程
  • 3.3. 實驗問題與解決方案