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CRISPR-dCas9定點調(diào)控技術(shù)路線

概要：

1.設(shè)計sgRNA

2.構(gòu)建sgRNA表達(dá)載體

3.構(gòu)建dCas9-SAM基因激活表達(dá)載體，dCas9-KRAB基因沉默表達(dá)載體

4.建立dCas9-SAM穩(wěn)轉(zhuǎn)株、dCas9-KRAB穩(wěn)轉(zhuǎn)株

5 .轉(zhuǎn)染sgRNA

6 .ChIP檢測dCas9系統(tǒng)的靶向效率

7 .qPCR或WB檢測下游基因表達(dá)

• 1 . CRISPR-Cas9系統(tǒng)
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機(jī)制
  • 1.3. 不同的Cas9系統(tǒng)
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統(tǒng)
• 2 . CRSPER- dCas9系統(tǒng)
  • 2.1. dCas9-轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統(tǒng)
  • 2.3. dcas9-表觀遺傳系統(tǒng)
• 3 . dCas9技術(shù)路線
  • 3.1. gRNA設(shè)計
  • 3.2. dCas9實驗流程
  • 3.3. 實驗問題與解決方案