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CRISPER-Cas9系統(tǒng)的組成
CRISPR Cas9靶向基因組編輯系統(tǒng)有兩個組成部分：①內(nèi)切核酸酶-Cas9和②指導RNA-gRNA（圖2）。內(nèi)切核酸酶是來自釀膿鏈球菌的Cas9核酸酶蛋白。 Cas9核酸酶具有切割雙鏈DNA的活性結(jié)構(gòu)域（RuvC1和HNH樣核酸酶結(jié)構(gòu)域），使得雙鏈DNA斷裂。 gRNA是由起支架功能的tracrRNA與特異性的crRNA結(jié)合形成的嵌合RNA。后來，人們將這兩段RNA拼接成一條短RNA，稱為sgRNA。 gRNA 5'末端的20bp是特異性的結(jié)合序列-尋靶裝置，通過RNA-DNA堿基配對將Cas9 / gRNA復合物募集到特異的DNA靶點。特異性結(jié)合序列相鄰的是PAM（Protospacer Adjacent Motif）基序。PAM基序是內(nèi)切核酸酶Cas9的識別位點，Cas9的PAM基序為5'-NGG。Cas9核酸酶在PAM基序上游第3個堿基處切割雙鏈DNA。
Figure 2 ：The last 20 base pairs of the gRNA acts as a homing device, recruiting the Cas9 endonuclease to the appropriate target sequence. Once there, the two cleavage domains of the Cas9 create a double stranded break 3 or 4 base pairs downstream of the PAM sequence. The DSB is then repaired by either the error-prone non-homologous end joining repair pathway, or the template-dependent homology directed repair
