技術(shù)專題
技術(shù)服務(wù)
技術(shù)專題
聯(lián)系我們
廣州賽誠生物科技有限公司
廣州市黃埔區(qū)學(xué)大道攬?jiān)侣窂V州企業(yè)孵化器B座402
電話：020-85625352
手機(jī)：18102256923、18102253682
Email：servers@gzscbio.com
Fax：020-85625352
QQ：386244141
廣州市黃埔區(qū)學(xué)大道攬?jiān)侣窂V州企業(yè)孵化器B座402
電話：020-85625352
手機(jī)：18102256923、18102253682
Email：servers@gzscbio.com
Fax：020-85625352
QQ：386244141
您當(dāng)前所在的位置：首頁>>技術(shù)專題
>>基因表達(dá)調(diào)控
>>基因表達(dá)調(diào)控實(shí)驗(yàn)技術(shù)
>>DNA pull-down
DNA pull-down
DNA pull-down
針對目標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)特異性DNA探針并經(jīng)過脫硫生物素標(biāo)記，脫硫生物素探針可以和偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素親和結(jié)合。然后，細(xì)胞核提取物與磁珠-DNA探針孵育，作用蛋白質(zhì)分子可以和DNA探針特異性結(jié)合；經(jīng)過洗滌可以將非特異性結(jié)合蛋白質(zhì)去除；最后，經(jīng)洗脫液洗脫，得到目的DNA探針-蛋白質(zhì)復(fù)合物，再經(jīng)過Western Blot或質(zhì)譜（MS）鑒定蛋白質(zhì)類型。
在DNA pull-down實(shí)驗(yàn)過程中我們設(shè)置一系列的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)以確保每一步實(shí)驗(yàn)的真實(shí)有效，如DNA探針跑膠檢測、產(chǎn)物銀染圖。具體示例如下圖所示：
上圖為DNA探針跑膠圖，保證了DNA探針的質(zhì)量。
DNA pull-down產(chǎn)物通過跑膠銀染檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組是否含有差異條帶，以確保結(jié)果的可靠性。
DNA pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果一般為產(chǎn)物的WB驗(yàn)證或MS分析數(shù)據(jù)，下圖為DNA pull-down產(chǎn)物的WB結(jié)果示例。
用非生物素標(biāo)記的DNA探針作為陰性對照，表明目的DNA片段能與預(yù)測的靶標(biāo)蛋白結(jié)合。
目錄瀏覽