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>>基因表達(dá)調(diào)控
>>基因表達(dá)調(diào)控實(shí)驗(yàn)技術(shù)
>>CLIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)
CLIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)
CLIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)
Clip(crosslinking-immunprecipitation)染色質(zhì)免疫沉淀，是一項(xiàng)體內(nèi)研究RNA分子與RNA結(jié)合蛋白相互作用的革命性技術(shù)。其主要原理是基于RNA與其相應(yīng)的RNA結(jié)合蛋白會(huì)在紫外照射下會(huì)發(fā)生共價(jià)結(jié)合，以RNA結(jié)合蛋白的特異性抗體將RNA-蛋白復(fù)合物沉淀之后，回收其中的RNA片段，進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)或測(cè)序分析。最近，這項(xiàng)技術(shù)也被應(yīng)用于microRNA的靶標(biāo)鑒定。
在CLIP實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我們?cè)O(shè)置一系列的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)以確保每一步實(shí)驗(yàn)的真實(shí)有效，如WB驗(yàn)證抗體和蛋白表達(dá)、CLIP產(chǎn)物RT-PCR跑膠圖。具體示例如下圖所示：
WB檢測(cè)抗體的效果以及處理和未處理組細(xì)胞蛋白的表達(dá)。
CLIP實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物可進(jìn)行高通量測(cè)序或者進(jìn)行dot blot檢測(cè)。
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