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基因表達調(diào)控實驗技術(shù)
基因表達調(diào)控一般分為轉(zhuǎn)錄前的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。轉(zhuǎn)錄前的調(diào)控包括基因組DNA的修飾和組蛋白的修飾,這里可能涉及到修飾酶與啟動子互作、LncRNA與修飾酶與啟動子的互作,可以通過CHIP、RIP、co-IP、RNA pull down、DNA pull-down等實驗技術(shù)進行驗證;轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控包括轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)錄抑制因子對基因啟動子的作用,LncRNA與轉(zhuǎn)錄因子互作,LncRNA與基因互作等,這些可以通過啟動子Luciferase活性、CHIP、RIP、CLIP、CHIRP、RNA pull down、DNA pull-down、DNA EMSA、RNA-蛋白FISH等實驗技術(shù)進行驗證;轉(zhuǎn)錄后調(diào)控包括LncRNA與mRNA互作、LncRNA與microRNA互作(ceRNA機制)、microRNA與mRNA互作、LncRNA與mRNA結(jié)合蛋白互作等,可通過3’-UTR Luciferase活性、RIP、CLIP、RNA pull down、RNA-RNA pull-down、RNA EMSA、RNA-蛋白FISH、RNA-RNA FISH等實驗技術(shù)進行驗證。對于一種RNA或蛋白參與的是基因表達調(diào)控哪個階段,可以通過核質(zhì)分離和FISH進行細胞的定位初步確定,位于細胞核的一般參與的是轉(zhuǎn)錄前和轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控,位于細胞質(zhì)的一般參與轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控。
下面我們將介紹在基因表達調(diào)控中所用到的一些關(guān)鍵的實驗技術(shù)服務(wù)項目。
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