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項目名稱：Luciferase（3’UTR活性驗證）
所屬分類：Lucifefase實驗
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技術服務描述
螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內(nèi)源性螢光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報告基因?qū)嶒炌鶗艿礁鞣N實驗條件的影響，而雙報告基因則通過共轉(zhuǎn)染的“對照”作為內(nèi)參為實驗提供一基準線，從而可以在最大程度上減小細胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對實驗的影響，使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信。Dual-Luciferase雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)在細胞中同時表達螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶，兩者沒有種源同源性并對應不同的反應底物，故而沒有交叉干擾。得益于超強的光信號和超高的信噪比，本系統(tǒng)被廣泛用于miRNA靶基因驗證。
由于miRNA主要通過作用于靶基因的3’UTR起作用，可以將目的基因3’UTR區(qū)域構(gòu)建至載體中報告基因luciferase的后面， 通過比較過表達或者干擾miRNA后，報告基因表達的改變（監(jiān)測螢光素酶的活性變化）可以定量反映miRNA對目的基因的抑制作用；結(jié)合定點突變等方法進一步確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點。
miRNA靶基因Luciferase實驗常用載體——psiCHECK2
PCR擴增Luciferase點突變靶基因
服務流程
1. PCR擴增靶基因的3’-UTR（WT），或直接合成結(jié)合位點序列；
2. 點突變設計靶基因的3’-UTR（MUT）并以PCR擴增，或直接合成序列；
3. 將上述兩種DNA片段分別克隆至報告載體psiCHECK2質(zhì)粒；
4. 將報告載體與模擬物（mimic）或抑制物（inhibitor）共轉(zhuǎn)染待檢細胞；
5. 多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平。
客戶提供
1. 目的基因、目的miRNA的相關信息；
2. 目的miRNA的模擬物（mimic）或抑制物（inhibitor）；
3. 作克隆模板用途的細胞或組織樣品；
4. 需轉(zhuǎn)染并作最后檢測用途的細胞樣品。
賽誠提供
1. 原始數(shù)據(jù)、結(jié)果圖片；
2. 標準實驗報告；
3. SCI標準Result Figure。