廣州市黃埔區(qū)學(xué)大道攬月路廣州企業(yè)孵化器B座402
電話：020-85625352
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Email：servers@gzscbio.com
Fax：020-85625352
QQ：386244141
項目名稱：Luciferase（啟動子活性驗證）
所屬分類：Lucifefase實驗
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技術(shù)服務(wù)描述
轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用。螢光素酶報告基因?qū)嶒灒?/span>luciferase Assay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段，其原理簡述如下：（1）用靶啟動子的特定片段替換報告基因質(zhì)粒（如pGL3-basic）的啟動子區(qū)。（2） 將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)。如果該轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動子，則螢光素酶就會表達(dá)，且其表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強(qiáng)度成正比。（3） 加入特定的底物，螢光素酶與底物反應(yīng)，產(chǎn)生螢光素，檢測熒光的強(qiáng)度可以對螢光素酶的活性定量，進(jìn)而判斷該轉(zhuǎn)錄因子能否與靶啟動子片段發(fā)生作用 （及其作用強(qiáng)度）。
Promoter活性Luciferase實驗常用載體——pGL3
Promoter片段缺失Luciferase分析
PCR擴(kuò)增Luciferase點突變靶基因
服務(wù)流程
1. PCR擴(kuò)增靶基因的Promoter，或直接合成結(jié)合位點序列；
2. 片段裁切或點突變設(shè)計靶基因的Promoter并以PCR擴(kuò)增，或直接合成序列；
3. 將上述不同DNA片段分別克隆至報告載體pGL4質(zhì)粒；
4. 將報告載體轉(zhuǎn)染待檢細(xì)胞；
5. 多功能酶標(biāo)儀檢測報告基因的表達(dá)水平。
客戶提供
1. 目的基因、目的miRNA的相關(guān)信息；
2. 目的miRNA的模擬物（mimic）或抑制物（inhibitor）；
3. 作克隆模板用途的細(xì)胞或組織樣品；
4. 需轉(zhuǎn)染并作最后檢測用途的細(xì)胞樣品。
賽誠提供
1. 原始數(shù)據(jù)、結(jié)果圖片；
2. 標(biāo)準(zhǔn)實驗報告；
3. SCI標(biāo)準(zhǔn)Result Figure。